低聚半乳糖(GOS)是一種常見(jiàn)的功能性低聚糖，可作為益生元添加到食品中，也可以作為保健品使用。目前低聚半乳糖的新國(guó)標(biāo)GB5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的測(cè)定》開(kāi)始正式實(shí)施。
由于低聚半乳糖沒(méi)有紫外吸收基團(tuán)，一般檢測(cè)方法是使用通用性檢測(cè)器，但靈敏度較差，因此常會(huì)選擇對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行衍生后檢測(cè)。2-氨基苯甲酰胺因?yàn)榫哂休^強(qiáng)的熒光信號(hào)，被廣泛的應(yīng)用于還原性糖衍生檢測(cè)。在色譜分析中對(duì)于糖類(lèi)的檢測(cè)主要差異是親水作用力，所以常選擇親水模式進(jìn)行分離。基于以上原理，GB5009.289-2023采用2-氨基苯甲酰胺作為衍生劑，使用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。
參照GB5009.289-2023要求，使用S6000高效液相色譜搭配和曦科技Morphling HILIC-Amide色譜柱進(jìn)行食品中低聚半乳糖的測(cè)定，
分析條件
儀器：S6000 FL
色譜柱：和曦科技Morphling HILIC-Amide, 4.6 × 150 mm, 5 μm, 100 ?
流動(dòng)相：A：甲酸銨溶液，B：乙腈
柱溫：30 ℃
激發(fā)波長(zhǎng)：355 nm
發(fā)射波長(zhǎng)：430 nm
流速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20 μL
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
前處理方法
稱(chēng)取1.0 g試樣，用水定容至50 mL并混勻，作為試樣液。
吸取20 μL試樣液，加入200 μL 2-氨基苯甲酰胺衍生溶液，渦旋混勻，在60 ℃水浴中保溫120 min，放至室溫后，加入1 mL乙酸銨溶液（0.2 mol/L，pH=4.50）渦旋混合。移取0.5 mL混合溶液，加入200 μL淀粉葡糖甘酶溶液（180 U/mL），50 ℃水浴保溫30 min。放至室溫后，加入0.7 mL乙腈，混勻后6000 r/min離心5 min，上清液用0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，待測(cè)。
使用同樣方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行衍生后，待測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)
采用上述液相方法，對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行衍生化后上機(jī)檢測(cè)。結(jié)果如下圖所示，結(jié)果表明，7種化合物峰形較好，分離度滿足要求。
圖1 7種標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生物色譜圖
（A：空白溶液；B：混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液）
1 麥芽糖衍生物、2 乳糖衍生物、3 麥芽三糖衍生物、4 麥芽四糖衍生物、5 麥芽五糖衍生物、6 麥芽六糖衍生物、7 麥芽七糖衍生物）
結(jié)論
采用S6000高效液相色譜儀搭配和曦科技Morphling HILIC-Amide（ 4.6 × 150 mm, 5 μm, 100 ?）色譜柱進(jìn)行食品中低聚半乳糖檢測(cè)，各化合物分離度、線性、靈敏度均滿足GB 5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的測(cè)定》的要求。
