UHPLC色譜柱的基本原理是利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能分配的不同，或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配作用，從而使各組分分離.色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用主要包括分離混合物，精致提純化合物，鑒定化合物，觀察一些反應(yīng)是否完成等等；吸附色譜主要以氧化鋁、硅膠等為吸附劑，將一些物質(zhì)自溶液中吸附到它的表面，而后用溶劑洗脫或展開(kāi)，利用不同化合物受到吸附劑的不同吸附作用，和它們?cè)谌軇┲胁煌娜芙舛龋簿褪抢貌煌衔镌谖絼┖腿芤褐g的分布情況不同而得到分離。吸附色譜分離課可采用柱色譜和薄層色譜兩種方式。
UHPLC色譜柱使用注意事項(xiàng)：
·使用時(shí)請(qǐng)按照色譜柱標(biāo)簽上的箭頭方向來(lái)進(jìn)行通液操作。
·請(qǐng)確認(rèn)系統(tǒng)壓力計(jì)的數(shù)值為零后再進(jìn)行色譜柱的拆卸。
·柱壓以100Mpa左右為上限基準(zhǔn)。連續(xù)在上限壓力附近使用以及壓力急劇變化的情況都會(huì)造成色譜柱使用壽命縮短，請(qǐng)多加注意。使用乙腈作為流動(dòng)相時(shí)，推薦流速為色譜柱50*2.0mm l.D.時(shí)0.3~0.8mL/min，50*3.0mm l.D.時(shí)0.6~1.8mL/min左右。柱壓會(huì)根據(jù)柱長(zhǎng)、柱溫、以及有機(jī)溶劑種類(lèi)的不同發(fā)生變化，請(qǐng)適當(dāng)調(diào)整流速。
·從水性溶劑到非水性溶劑都可使用，但在不同的溶劑之間進(jìn)行反復(fù)置換會(huì)導(dǎo)致分析柱的性能降低。一般可使用的有機(jī)溶劑為乙腈，甲醇，四氫呋喃(THF)等。使用THF時(shí)請(qǐng)注意PEEK管材的耐有機(jī)溶劑性能。
·如需置換流動(dòng)相，請(qǐng)注意有機(jī)溶劑之間的混合性和鹽的析出現(xiàn)象。另外為了使樣品和溶解樣品的溶劑中所含鹽類(lèi)不發(fā)生析出現(xiàn)象，請(qǐng)確認(rèn)他們對(duì)于流動(dòng)相的混合性后再進(jìn)行注入。
·樣品盡量使用和初期流動(dòng)相同一組成的溶劑來(lái)進(jìn)行溶解。如使用溶解性比流動(dòng)相更高的溶劑，峰可能會(huì)變寬，并導(dǎo)致分離度和重現(xiàn)性下降。
·為了預(yù)防因篩板的堵塞而引起的柱壓上升，流動(dòng)相及樣品溶液請(qǐng)預(yù)先使用0.2um以下的過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾。
